ABSTRACT
Peptídeos Antimicrobianos (PAMs) são os principais elementos da imunidade inata contra bactérias e fungos em ambos os reinos: animal e vegetal. PAMs são um grupo extremamente diversificado de pequenas proteínas e sua função é essencial para a resposta imunológica dos organismos. Venenos animais são boas fontes de substâncias antimicrobianas, pois contêm um grande número de diferentes componentes biologicamente ativos de diferentes estruturas químicas, tais como proteínas, polipeptídeos e aminas. Toxinas que apresentam o nó cistina (CKTs) em venenos de aranhas representam uma rica fonte de novos ligantes para canais iônicos, e estão entre os constituintes mais estudados de venenos de aranha. Eles são moléculas pequenas, compactas ligadas por três a cinco pontes de dissulfeto, assegurando uma maior estabilidade na conformação da molécula que a contém, e, portanto, oferece um elevado potencial para aplicações na engenharia de proteínas. O nó d cistina ocorre numa grande variedade de peptídeos e proteínas e é relativamente comum em pequenas toxinas ricas em cisteína e pequenos peptídeos, com massas moleculares variando de 3,5 a 7 kDa. As toxinas que contêm o nó de cistina possuem uma alta gama de atividades biológicas, como atividade antimicrobiana, anti-HIV e bloqueio de canais iônicos. Este estudo teve como principal objetivo a caracterização do veneno e a identificação e caracterização de moléculas bioativas presentes no veneno da aranha caranguejeira Avicularia juruensis (Mygalomorphae, Theraphosidae), em especial peptídeos antimicrobianos. O veneno foi obtido por estimulação elétrica, diluído em água acidificada (TFA ácido trifluoracético 0,05%) e centrifugado. A parte solúvel foi submetida à cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em uma coluna semi preparativa Júpiter C18 de fase reversa. A presença de atividade antimicrobiana foi determinada por ensaio líquido de inibição de crescimento...
Subject(s)
Animals , Arachnida , Peptides/isolation & purification , Spider Venoms/isolation & purificationABSTRACT
The effect of the venom of the spider Lycosa erythrognatha on the frog sciatic nerve was investigated with the single sucrose-gap method. Solutions containing the crude venom (40 µg protein/ml) markedly increased the duration of compound action potentials and caused the appearance of long-lasting depolarizing post-potentials. These effects were only partially (20 percent) reversded by extensive washsing with control solution. The active material was sensitive to proteolytic treatments with pronase or trypsin and was separated with 20 percent acetonitrile and 0.1 percent trifluoroacetic acid by reverse phase chromatography. The effect of this fraction (LycIV) on the post-potential amplitude was concentration-dependent, and was fitted with a quadratic hyperbola having a half maximal effect of 0.9 µg protein/ml. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of LycIV showed an enriched polypeptide band with apparent molecular weight of ~8 kDa. The observed effects were similar to those of toxins that inhibit sodium channel inactivation and different from the effects of potassium channel blockers. Pore formation or membrane disruption could be ruled out. It was concluded that the venom contains a neurotoxic polypeptide that alters the repolarization of action potentials, probably by inhibiting sodium channel inactivation